一二三四观看视频社区在线,狠狠色丁香久久婷婷综合蜜芽五月,好男人WWW在线观看视频高清,久久免费99精品久久久久久蜜

網(wǎng)站導(dǎo)航

技術(shù)文章

當(dāng)前位置:主頁(yè) > 技術(shù)文章 > 一種免疫膠體金凍干方法示例

一種免疫膠體金凍干方法示例

更新時(shí)間:2020-05-07 點(diǎn)擊次數(shù):1862

免疫膠體金定性檢測(cè)因其快速、簡(jiǎn)便,在醫(yī)院檢驗(yàn)科已廣泛應(yīng)用,用于妊娠早期診斷的人絨毛膜促性腺激素(HCG)膠體金法診斷試劑制造及檢定規(guī)程已由中國(guó)生物制品規(guī)程公布,但尚未能達(dá)到定量的水平。免疫膠體金技 術(shù)常用于定性檢測(cè)微生物感染,近年上已有商品化免疫膠體金定量檢測(cè)試劑供應(yīng),較有代表性的是挪威Axis-Shield公司生產(chǎn)的NycoCard C 反應(yīng)蛋白定量、尿微量白蛋白定量、D-二聚體定量試劑盒,他們使用超微顆粒膠體金和硼酸鹽緩沖液使液相免疫膠體金有較好的穩(wěn)定性(NycoCardl 114365.Ed.581 July 2001),但尚未見(jiàn)有HCG膠體金凍干品。

免疫膠體金技術(shù)快速又簡(jiǎn)便,所以廣受歡迎,但要測(cè)定結(jié)果非常準(zhǔn)確, 則免疫膠體金必須有良好的穩(wěn)定性,這在免疫膠體金定量檢測(cè)中尤為重要,是發(fā)展金標(biāo)法快速定量檢測(cè)試劑的前提。

*生物制品凍干形式可以延長(zhǎng)其有效期,在產(chǎn)品運(yùn)輸過(guò)程中不必低溫運(yùn)輸。但免疫膠體金的膠體性能使它在凍干中會(huì)發(fā)生破乳現(xiàn)象,嚴(yán)重的破乳會(huì)造成肉眼可見(jiàn)的顆粒凝聚。輕度的破乳引起的微量顆粒凝聚, 在檢測(cè)過(guò)程中因直徑增大而通不過(guò)微孔纖維膜,滯留在膜上的紅色凝聚顆 粒就誤報(bào)為假陽(yáng)性的結(jié)果。因此膠體金的凍干存在技術(shù)突破。

解決的技術(shù)問(wèn)題是克服液相免疫膠體金穩(wěn)定性差的缺陷以及 膠體金凍干品制備中的破乳現(xiàn)象,提供一種具有良好穩(wěn)定性,能定量檢測(cè) 人絨毛膜促性腺激素(HCG)的膠體金凍干品。

一種定量檢測(cè)人絨毛膜促性腺激素(HCG)膠體金凍干品的制備方法包括如下步驟:

1.制備抗HCG抗體包被膠體金

常規(guī)制備空白的粒徑20nm左右的膠體金,呈透明的紅色或桔紅色, PH 5.4~5.6,在520nm、1厘米光徑時(shí)光吸收值OD在0.9~1.2。然后以 抗HCG抗體包被膠體金,抗體包被濃度0.01~0.05mg/ml,離心作結(jié)合/ 游離(B/F)分離;

2.制備膠體金溶液:

(1)混合裂解與不裂解的2,2’-[(1-甲基亞乙基)雙(4,1-亞苯基 甲醛)]雙環(huán)氧乙烷聚乙二醇衍生化合物。

濃度分別為:裂解物0.2mg~10.0mg/m1;不裂解物 0.2mg~10.0mg/ml。

上述裂解或不裂解物在上述濃度范圍內(nèi)可以用任意比例混合,優(yōu) 選比例是1∶1;

以上雙環(huán)氧乙烷聚乙二醇衍生化合物的裂解采用如下方法;

稱(chēng)聚乙二醇衍生化合物(美國(guó)Sigama公司,產(chǎn)品編號(hào)P2263,mp59 ℃,白色片狀結(jié)晶,溶于水,分子量15000~20000)50克,置三角燒瓶中 在石棉網(wǎng)上以微火加熱使其熔化,保持微沸4~5分鐘,室溫冷卻到40~50 ℃時(shí)加入1升蒸餾水,均勻溶解后即為5%裂解物;稱(chēng)上述聚乙二醇衍生化 合物50克,加入1升蒸餾水,均勻溶解后即為5%不裂解物。

(2)離心分離后的抗HCG膠體金沉淀以原體積1/5的含上述裂解和不裂 解物各2mg/ml、1~12%蔗糖、10-20mM磷酸鹽緩沖液PH 7.4懸浮;

3.制備膠體金凍干品

將膠體金溶液在-40℃預(yù)凍,轉(zhuǎn)入凍干機(jī)作冷凍干燥,升溫≤25℃。

B/F分離時(shí)如不加穩(wěn)定劑,離心后全部膠體金消失,只剩下少許片狀金屬不溶物,加入不同的穩(wěn)定劑保護(hù)。

OD值越高說(shuō)明片狀金屬不溶物越少,穩(wěn)定劑的效果越顯著。2,2’-[(1- 甲基亞乙基)雙(4,1-亞苯基甲醛)]雙環(huán)氧乙烷聚乙二醇衍生化合物或其裂解物或二者混合物為穩(wěn)定劑時(shí)的OD值相對(duì)傳統(tǒng)穩(wěn)定劑聚乙二醇20000 (PEG)較高,保護(hù)*。

上述穩(wěn)定劑也可用于其它免疫膠體金,例如葡萄球菌A蛋白(SPA)- 膠體金綴合物,用于臨床血清樣品中有關(guān)病原體的IgG抗體檢測(cè)。

制備免疫膠體金凍干品時(shí)除了含有上述穩(wěn)定劑(裂解或不裂解聚 乙二醇衍生化合物)外,必須含有1~12%蔗糖,否則凍干品必會(huì)有輕度的破乳,引發(fā)一定數(shù)量的假陽(yáng)性,蔗糖的加入量在此范圍即可,與其它穩(wěn)定劑無(wú)比例關(guān)系。

以上出自作者徐建新的《定量檢測(cè)人絨毛膜促性腺激素膠體金凍干品及制備方法》。

 

 

 

 

 

如果您有任何問(wèn)題,請(qǐng)跟我們聯(lián)系!

聯(lián)系我們

版權(quán)所有 © 2019 蓓迪(北京)科技有限公司 京ICP備20009046號(hào)-1 技術(shù)支持:化工儀器網(wǎng) 管理登陸 GoogleSitemap

公司暢銷(xiāo)產(chǎn)品:中試凍干機(jī),中試?yán)鋬龈稍?制藥凍干機(jī),實(shí)驗(yàn)室凍干機(jī)

在線(xiàn)客服 聯(lián)系方式 二維碼

服務(wù)熱線(xiàn)

13520353164

掃一掃,關(guān)注我們