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好的PCR分子凍干機是凍干成功的關鍵

更新時間:2022-09-07 點擊次數(shù):950
  PCR是一種新的核酸定量技術,該技術是在常規(guī)PCR的基礎上,加入熒光標記的探針或相應的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能。其原理是隨著PCR反應的進行,PCR反應產(chǎn)物不斷積累,熒光信號強度成比例增加;每次循環(huán)后采集熒光強度信號,通過熒光強度的變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到熒光擴增曲線。
  
  隨著臨床醫(yī)學和生物診斷試劑的發(fā)展,為滿足臨床需要,需要開發(fā)一種不需要低溫儲存和運輸?shù)臒晒釶CR擴增試劑。由于熒光PCR反應體系中含有活性酶、熒光探針等試劑,需要低溫保存,以免其化學性質發(fā)生變化,因此需要冷凍干燥。凍干熒光PCR試劑的主要方法步驟包括:
 
  

PCR分子凍干機
 

 

  1、液體準備。熒光PCR擴增緩沖液、引物、探針、酶和凍干保護劑按配方混合,凍干保護劑的選擇非常重要。常見的凍干保護劑包括糖類、多元醇、聚合物、表面活性劑、氨基酸、鹽類等。一種可凍干的保護劑通常含有一種以上的保護劑,但也可以組合使用多種保護劑。然而,凍干保護劑配方的探索是一個耗時的過程,也是凍干成功的關鍵。
  
  2、冷凍干燥。準備好上述可凍干反應試劑,分裝成PCR八管或定制PCR管,然后放入PCR分子凍干機,開始整個凍干過程。冷凍干燥過程通常分為三個不同的階段:預冷凍階段、初級干燥階段和次級干燥階段。在預凍階段,溫度一般在-50~-40℃保持2-3H。預凍后,保持凍干機內(nèi)溫度不變,開始抽真空至5-10pa,保持10-20h。升華后,將凍干機內(nèi)部溫度升至-35~-25℃并在真空下保持1-2h,然后繼續(xù)將凍干機內(nèi)部溫度升至-5~5℃并保持1-真空下2h。最后,在真空下繼續(xù)將凍干機內(nèi)部溫度升至25-35℃,保持10-12h。凍干后可通入氮氣,然后按下塞子即可完成整個凍干操作。凍干法制備的熒光PCR試劑可在室溫避光保存。它性質穩(wěn)定,易于運輸和使用。使用時只需加入溶解液或稀釋劑即可。
  
  PCR分子凍干機采用不銹鋼板設計,保證箱體表面光潔度,從而保證無菌要求。所設計的板層強度高,可保證在長期使用過程中對壓蓋無滲漏、變形和影響。板層通過機械加工可以保證對平整度要求高,平整度好,凍干箱板層溫度均勻性好。板層控制溫度-55~70℃,控制溫度范圍寬,加熱和冷卻溫度可控,效率高。冷阱的極限溫度≤-85℃,可對-50以上的任何共晶點進行凍干,適用范圍廣,對低共晶點溫度的分子試劑更安全。

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